Bistua: Revista de la Facultad de Ciencias Básicas

In this work a selective method for determination of chlorophyll a, Chl a, on seawater samples by molecular fluorescence has been developed. A detection limit of 1,8 µg L^-1 for Chl a was obtained. A methodology of pigments extraction was optimized in this study. The best condition of extraction: 10 mL sample and 1 ml extraction volume,a nylon membrane filter (size pore 0.45 µm and 12 mm diameter) , were chosen by the results in the Chl a and b recovery obtained by application of univariate and multivariate calibration model on spiked samples. The partial square least squares regression model PLS1 and PLS2, were applied over extracts from spiked samples and over standard solutions of these chlorophylls. The application of PLS1 model allowed validating the procedure of extraction 1F-0,45 with recovery percentages nearly 100% for a sample volume of 10 ml and extraction volume of 1 mL. Multivariate model were compared with univariate calibration models, in all cases bigger accuracy was obtained by use of PLS1 model. The PLS2 model was lees efficient in the simultaneous quantification of Chl a and b, a poor accuracy was obtained for Chl a and the bests results in the prediction were obtained for Chl b. This result this according with reported previous work, of the overestimation of Clo a in presence of Clo b by fluorometric methods.

Resumen:

Se desarrolló un método fluorométrico de determinación selectiva de la clorofila a, Clo a, en extractos de muestras de agua de mar, con un límite de detección de 1,8 µg L^-1. Se optimizó una metodología simple de extracción de los pigmentos fotosintéticos, utilizando un filtro de membrana de nylon de 13 mm de diámetro y tamaño de poro de 0,45 µm, para la separación del fitoplancton. Para la extracción de los pigmentos se utilizó etanol. Se disminuyó el volumen de muestra (10 mL) y el volumen de extracción (1 mL) en función del tamaño de filtro utilizado. Este procedimiento se validó por el proceso de “spiking” sobre muestras de agua de mar. Se comparó la aplicación de modelos de calibración univariados y multivariados, PLS 1 y PLS2, en la determinación de la recuperación de Clo a en muestras “spiked”. En todos los casos se observa que el modelo de regresión de mínimos cuadrados parciales, PLS1 permitió incrementar la exactitud del análisis, obteniendo porcentajes de recuperación de Clo a cercanos al 100%. El modelo de calibración PLS2 para la determinación simultánea de Clo a y Clorofila b, Clo b, resulto ineficiente en la predicción de Clo a con un RMSEP del 50%. Este resultado esta acorde con lo reportado en la literatura de la sobre-estimación de la Clo a en presencia de la Clo b por métodos fluorométricos.