Bistua: Revista de la Facultad de Ciencias Básicas

Most of the clinical test in the actuality is based in fotocolorimetric assays were optical properties of target molecules are modified to shown determinate coloration. These modified molecules can be detected with simple systems as a photocolorimeter or more complex like spectrometers. Due to the high quantity of samples different kind of readout systems have been developed. The ELISA plate reader permit to read 96 samples, this equipments have a great sensitivity and the rate of lecture depends basically of the quality of the mechanical system. In this work we present the application of a build ELISA plate reader based in a superluminous led and webcam used as detector. The system permits to determinate simultaneously 96 samples. Using a software designed to acquire the image of the 96 well plate, digitizer and split in the RGB and intensity matrix in order that using a reference transform the image in absorbance data and with the adequate calibration curve in concentration. The system was employed in the determination of glucose, phosphate and proteins in blood. Our results present a excellent precision , CV=3%, and a are in the range of the700 y 1050 mg L^-1

Resumen:

La mayoría de los análisis clínicos que se realizan en la actualidad se basan en ensayos colorimétricos, donde las propiedades ópticas de la sustancia de interés es modificada para que exhiba una coloración determinada y la misma es detectada empleando desde sistemas tan sencillos como fotocolorimetros hasta espectrómetros altamente sofisticados. En muchos casos la cantidad de muestras es tan extenso que se han desarrollado sistemas como los lectores de placas de ELISA que permiten medir simultáneamente hasta 96 muestras. Esos lectores tienen una alta sensibilidad, formalmente el análisis no se realiza simultáneamente ya que se emplean sistemas mecánicos para desplazar la muestra y leer los 96 pozos uno a uno o en el mejor de los casos en grupos de 8. En el presente trabajo se muestra la aplicación de un lector de placas de ELISA que emplea leds superluminosos como fuente de iluminación y una webcam como detector que permite determinar la concentración de soluciones coloreadas en los 96 pozos de la placa de ELISA simultáneamente. Se diseño un software que permite tomar imágenes de la placa de ELISA, digitalizarla, separarla en sus componentes RGB e intensidad. De esta manera se transformas las imágenes en superficies de respuesta de intensidades para cada color al que responde los filtros de la cámara, permitiendo de esta forma al compararlo con una referencia, calcular la absorbancia de un punto en particular de la imagen y así mediante una curva de calibración obtener la concentración de una determinada sustancia en ese punto. El sistema diseñado se empleo para medir concentraciones de Glucosa, cuyos valores oscilaron entre 700 y 1050 mg L^-1 en sangre de ratas.